超临界流体色谱（SFC），也称为“二氧化碳色谱”，是过去几十年中研究的一种“绿色色谱”技术。其高分离效率，结合快速 流动 相梯度和宽选择性，使得SFC成为许多分析领域中液相色谱（LC）的有趣补充 技术。最近的研究还表明，通过SFC可分离化合物的范围明显比仅通过反相液相色谱（RPLC）或亲水 相互作用液相色谱（HILIC）要广泛。SFC可以很容易地与紫外检测和质谱（MS）检测一起使用，这为 旨在复杂样品中化合物的分离，提供巨大好处。然而，SFC中的保留机制比其他LC模式更为复杂。这通 常使得在方法开发中筛选不同 色谱柱变得必要，并找到最适合给定任务的柱子。为了比较各种柱子的 基本特性并评估SFC的适用性，AFIN-TS（An analytical research institute for non target screening） GmbH建立了一个柱子筛选模型。基于通用分离方法，可以研究色谱柱保留和分离具有广泛极性范围 化合物的能力。这样的筛选结果以一份特定证书的形式提供，旨在指导选择SFC方法开发的色谱柱。

研究方法

1. 柱子筛选模型 ：AFIN-TS GmbH建立了一个柱子筛选模型，基于通用分离方法，评估柱色谱在保留和分离广泛极性范围内的化合物方面的能力。

2. 实验系统 ：使用Agilent 1260 Infinity I SFC系统和Orbitrap Exploris 120 MS进行分离。系统包括二元泵、溶剂选择阀、自动进样器、柱温箱、柱选择阀、UV检测器和背压调节器。

3. 梯度洗脱 ：SFC分离的梯度洗脱程序如下：

0分钟：5% B

1分钟：5% B

8分钟：40% B

9分钟：40% B

9.5分钟：5% B

10分钟：5% B

4. MS检测：数据在全扫描模式下获取，并进行数据依赖的MS2采集。离子喷雾电压为+3.5 kV（正离子模式）/ -3.0 kV（负离子模式），鞘气流速为50 arb单位，辅助气流速为8 arb单位，离子传输管温度为320°C，蒸发器温度为350°C。

实验设计

1. 样品选择 ：使用从logP -3.90到+7.67极性范围的114种标准化合物混合物，最终浓度为2μmol/L，溶于50/50（v/v）乙 腈/水溶液。

2. 柱子和洗脱剂 ：使用两种柱子：

100x3 mm，3.5μm，iHILIC®-Fusion（P/N 114.103.0310，HILICON）

100x3 mm，3.5μm，iHILIC®-Fusion(+)（P/N 104.103.0310，HILICON）

洗脱剂包括A：二氧化碳（3.5级）和B: 异丙醇（梯度级）。

1. 流速和温度 ：流速为1.50 mL/min，柱温为40°C，背压为100 bar，进样体积为10μL。

结果与分析

1. 保留时间与logP的关系：图1和图2分别显示了iHILIC-Fusion和iHILIC-Fusion (+)柱子的保留时间与LogP值的关系。与RPLC不同，化合物的疏水性似乎不是主导SFC保留的关键参数，因此保留时间与logP之间没有严格的相关性。

2. 柱子的选择性比较：

图3显示了标准化合物在两个iHILIC柱子上的保留时间的正交性图。许多化合物之间存在线性相关性，但iHILIC-Fusion (+)对于某些后洗脱的化合物表现出更强的保留。此外，两种柱子都能独立分离化合物，表明它们之间存在一定程度的互补性。

3. 分离效果：

图4显示了四种标准化合物的提取离子色谱图，分别为iHILIC-Fusion（上图）和iHILIC-Fusion (+)（下图）。两种柱子都适用于SFC分离，并且能够分离从极性到非极性的整个化合物范围。

总结：

这个研究评估了iHILIC-Fusion和iHILIC-Fusion(+)柱子在SFC分离中的适用性。结果表明，这两种色谱柱都适用于广泛的化合物分离，并且它们之间的选择性差异对于特定的SFC方法开发具有价值。研究结果为选择合适的柱子提供了指导，有助于优化复杂样本的分离效果。

 

本文由腾讯AI生成，Ruby Cai审阅修改

原文下载：SFC Separations with iHILIC-Fusion and iHILIC-Fusion(+) Columns

中文翻译下载：iHILIC Fusion和iHILIC Fusion（+）色谱柱的SFC分离评估

友情链接：Analytisches Institut for Non-Target Screening - AFIN-TS GmbH