使用 iSPE®-HILIC材料 以 Drop-HILIC 方法有效富集糖肽

来自澳大利亚昆士兰州南港格里菲斯大学糖组学研究所和HILICON LAB的Kathirvel Alagesan、Wen Jiang、Daniel Kolarich的人使用iSPE®-HILIC材料，以Drop-HILIC方法，对糖肽进行有效富集的能力，解决了糖肽分析中的围观异构 和低离子化效率的问题，并通过MALDI-TOF-MS实现了成功的检测。

背景信息:

• 文章背景: 糖蛋白组学的目标不仅在于识别糖链的组成，还包括糖基化位点及其附着的蛋白质。然而，糖肽分析的挑战主要来自于其微heterogeneity，导致每个糖肽分子的浓度相对于未改性肽的显着降低，及相较于未糖基化对应物的低离子化效率。因此，进行选择性和高效的糖肽富集至关重要。
• 过去方案: 此前，采用正相液相色谱和许多其他方法进行糖肽富集存在严重的偏见，无法实现不同糖类型的低偏倚富集。HILIC方法因其基本的分离机制而成为一种受欢迎的富集选择，但仍面临低离子化效率的问题。
• 该研究的创新: 鉴于目前的挑战，作者提出了一种基于iSPE®-HILIC小柱的方法，旨在通过增强糖肽的选择性和富集效率，从而实现更可靠的糖蛋白组学分析，为深入研究糖基化提供了一种方便有效的解决方案。

实验方法:

• a. 理论背景:
  • 本研究旨在评估iSPE®-HILIC材料在糖肽富集中的效率和选择性，使用人类免疫球蛋白G (IgG) 作为标准样本。
• b. 技术路线:
  • 将三微克标准糖蛋白（人类IgG）进行胰蛋白酶消化。
  • 采用25 mg的iSPE®-HILIC材料50 μm，60 Å，HILICON）应用Drop-HILIC方法富集糖肽。
  • 将干燥的样品（约含30 ng富集糖肽）重溶于100 μL的0.1% TFA中，随后进行MALDI-TOF-MS分析。

试验结果:

• a. 详细的实验设置:
  • 使用等体积的样品和基质溶液（20 mg/mL 2,5-二羟基苯甲酸[DHB]在30%乙腈/0.1% TFA中）点涂于MTP 384靶板（Bruker Daltonics）。
  • 采用配备Smartbeam™ 3D激光光学的质谱仪（Bruker Daltonics），以5000 Hz频率运行，并通过FlexControl 4.0软件控制。
  • 在正反射模式下进行质谱分析，质量范围为m/z 1000至4000，每个点积累20,000次激发，随后进行基线校正和高斯算法平滑处理（m/z 0.2宽度，1次循环）。
• b. 详细的实验结果:
  • 通过MALDI-TOF-MS分析，从30 ng的糖蛋白样品中识别出14个单独的糖肽。然而，在非富集样品中未检测到与IgG糖肽对应的信号，但观察到与几个未修饰极性肽的共富集现象，未对糖肽的检测造成干扰。

英文原文下载链接：Effective-Enrichment-of-Glycopeptides-in-Drop‑HILIC_iSPE-HILIC

原文中文翻译下载链接：使用iSPE®-HILIC以Drop-HILIC方法有效富集糖肽

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